ایس پی مضبوط کیشن ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی۔

CM کمزور آئن کا تعارف-ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی مصنوعات

 

1. جائزہ

CM کمزور کیشن- ایکسچینج کرومیٹوگرافی ایک پیوریفیکیشن ٹیکنالوجی ہے جس میں کاربوکسی میتھائل گروپس کو جھلی کے ساتھ جوڑ کر ایک فنکشنل ماڈیول بنایا جاتا ہے۔ مختلف بائیو مالیکیولز کے چارج کی خصوصیات اور چارج کثافت میں فرق کی بنیاد پر علیحدگی حاصل کی جاتی ہے۔ چونکہ زیادہ تر حیاتیاتی میکرو مالیکیولز کاربوکسیل یا ہائیڈروکسیل گروپس پر مشتمل ہوتے ہیں، ان کے چارج کی خصوصیات اور شدت کو بفر محلول کی pH قدر کو تبدیل کرکے ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔ بائیو مالیکیولز مخالف چارجز والے جھلی کے ماڈیول سے منسلک ہونے کے بعد، موبائل فیز کی آئنک طاقت یا پی ایچ کو تبدیل کرکے ایلیوشن انجام دیا جاتا ہے۔ کمزور بائنڈنگ وابستگی والے مالیکیولز کو پہلے الگ کیا جاتا ہے، جبکہ مضبوط پابند وابستگی والے مالیکیولز کو بعد میں ختم کیا جاتا ہے، اس طرح موثر علیحدگی حاصل ہوتی ہے۔

 

2. مصنوعات کے فوائد

2.1 تیز اور موثر: روایتی رال پر مبنی کرومیٹوگرافی سے 40 گنا تیز بہاؤ کی شرح پر اعلی پابند صلاحیت حاصل کی جا سکتی ہے۔ روایتی پیکڈ-بیڈ کرومیٹوگرافی کے مقابلے میں، جھلی کی کرومیٹوگرافی عمل کے وقت کو 30–40 گنا کم کر سکتی ہے۔ عام آپریٹنگ بہاؤ کی شرح 10 MV/منٹ ہے۔

2.2 ہائی بائنڈنگ ایفیشنسی: میمبرین کرومیٹوگرافی کم پریشر ڈراپ کے حالات میں زیادہ لوڈنگ کی صلاحیت اور ہائی فلو ریٹ کو ظاہر کرتی ہے، جس سے چارج شدہ بائیو مالیکیولز کو ماڈیول کے ذریعے ایک ہی پاس میں پکڑا جا سکتا ہے۔

2.3 توسیع پذیر اور لچکدار: جھلی کرومیٹوگرافی کی مصنوعات کی مکمل رینج مختلف بائیو میکرومولیکول پروسیسنگ کی ضروریات کو پورا کر سکتی ہے، جس میں عمل کی ترقی سے لے کر بڑے پیمانے پر مینوفیکچرنگ تک کے مراحل کا احاطہ کیا جا سکتا ہے۔ کیپسول ڈیزائن سنگل استعمال کی ایپلی کیشنز کی اجازت دیتا ہے یا ضرورت کے مطابق صاف اور دوبارہ استعمال کیا جا سکتا ہے۔

2.4 پیداواری صلاحیت میں اضافہ: کمپیکٹ ڈیزائن سہولت کے نشان کو کم کرتا ہے۔ کالم کی پیکنگ، صفائی، صفائی کی توثیق، اور کالم اسٹوریج کے مراحل کو ختم کرکے، بفر کے نسبتا چھوٹے حجم کے ساتھ توازن کے بعد پروسیسنگ شروع ہوسکتی ہے۔ کالم پیکنگ، صفائی، یا ذخیرہ کرنے کی ضرورت کے بغیر، مزدوری کے اخراجات کو 50% سے زیادہ تک کم کیا جا سکتا ہے۔

 

3 تکنیکی پیرامیٹرز

3.1 ساختی مواد

	لیبارٹری پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانہ	پیداوار کا پیمانہ
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	140 ملی لیٹر	5L
جھلی کی حمایت کی ساخت	پولی پروپیلین
جھلی ہاؤسنگ	پولی پروپیلین
اے انگوٹھی	سلیکون ربڑ

3.2 آپریٹنگ خصوصیات

	لیبارٹری پیمانہ	چھوٹا- پیمانہ	پائلٹ- پیمانہ	پیداوار کا پیمانہ
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L
تجویز کردہ بہاؤ کی شرح	1-6 ملی لیٹر/منٹ	25-150ml/min	2-12L/منٹ	25-150L/منٹ
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ درجہ حرارت	35 ڈگری
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ دباؤ	3 بار (25 ڈگری)
زیادہ سے زیادہ دباؤ کا فرق	3 بار (25 ڈگری)
ذخیرہ کرنے کے حالات	20% ایتھنول آبی محلول

روایتی میڈیا کے مقابلے میں، سی ایم میمبرین کرومیٹوگرافی کی سروس لائف سی ایم ایگروز جیل 6 ایف ایف کے مقابلے ہے۔

تصویر 1. لائزوزائم ٹیسٹنگ میں متعدد استعمال کے بعد سی ایم میمبرین کرومیٹوگرافی کی لوڈنگ کی صلاحیت میں تبدیلیاں۔

مزید برآں، ہم نے جھلی کرومیٹوگرافی کے ذریعے میزبان سیل پروٹینز اور نیوکلک ایسڈز کو ہٹانے کی کارکردگی کا جائزہ لیا۔ نتائج ذیل میں دکھائے گئے ہیں۔

ٹیبل 1. CHO-میں ڈی این اے اور میزبان سیل پروٹین کو ہٹانے کی شرح CM میمبرین کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے IgG مواد کو ظاہر کرتی ہے

تجربات کی ایک سیریز نے یہ ثابت کیا کہ سی ایم میمبرین کرومیٹوگرافی ٹارگٹ آئی جی جی کی اعلی بحالی کی شرح کو برقرار رکھتے ہوئے آلودگیوں کو مؤثر طریقے سے ہٹا سکتی ہے۔

	ڈی این اے				ایچ سی پی
	آئی جی جی ریکوری	RT PCR کے ذریعے مواد (IgG کا pg/mg)		ہٹانے کا عنصر	ایلیسا کا مواد (آئی جی جی کا ng/mg)		ہٹانے کا عنصر
دوڑو	%	کیو جھلی سے پہلے	کیو میمبرین کے بعد	لاگ	کیو جھلی سے پہلے	کیو میمبرین کے بعد	لاگ
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

دیگر برانڈز کے مقابلے میں Gudiling CM membrane chromatography کا استعمال کرتے ہوئے، لوڈنگ کی صلاحیت کا ڈیٹا ذیل میں دکھایا گیا ہے۔

لوڈنگ کی گنجائش (ملی گرام/ملی لیٹر)	جِنگ بیاؤ 1	رہنمائی کرنا
لائسوزیم	18	23
ٹرپسن	17	20

جدول 2۔ حریف مصنوعات کے مقابلے ہماری مصنوعات میں مختلف پروٹینوں کی لوڈنگ کارکردگی

مجموعی تشخیص سے پتہ چلتا ہے کہ ہماری لوڈنگ کی صلاحیت درآمد شدہ مصنوعات کے مقابلے میں ہے۔

تصویر 2. لائسوزیم کو معیاری پروٹین کے طور پر استعمال کرتے ہوئے سی ایم میمبرین کرومیٹوگرافی ماڈیول کی لوڈنگ کی صلاحیت ٹیسٹ۔

متحرک لوڈنگ کی صلاحیت کا موازنہ بھی درآمد شدہ مصنوعات سے کیا گیا۔ توثیق سے پتہ چلتا ہے کہ 160 mM NaCl کا استعمال کرتے ہوئے لائزوزائیم کو خارج کیا جا سکتا ہے، جو زیادہ تر ٹارگٹ پروٹینز کی موثر گرفت کی اجازت دیتا ہے۔

اخراج کے مختلف حالات کی اصلاح کے ذریعے، ہم نے پایا کہ جھلی کی کرومیٹوگرافی ایگرز جیل کرومیٹوگرافی کی طرح ایلیوشن رویے کی نمائش کرتی ہے، جہاں نمک کی مختلف ارتکاز کے تحت پروٹین کی پاکیزگی نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہے۔ عملی R&D اور پیداوار میں، اعلی-پاکیزگی کا ہدف پروٹین حاصل کرنے کے لیے توازن کے اخراج کے حالات کا مقداری تعین کرنا ضروری ہے۔

 

4. عام درخواست کے معاملات

• ڈی این اے، وائرس، اور میزبان سیل پروٹین کو ہٹانا
• پلازمیڈز، وائرسز اور پروٹینز کی گرفت کے ساتھ ساتھ اولیگونوکلیوٹائڈس کو صاف کرنا
• خمیر کے ابال کے شوربے کی رنگین کاری اور اعلی-کیپچر پروٹین کیپچر

 

5. آپریٹنگ طریقہ کار / ورک فلو

5.1: سامان کی تیاری اور اسمبلی:

5.1.1: ایک AKTA کرومیٹوگرافی سسٹم پر میمبرین کرومیٹوگرافی ماڈیول انسٹال کریں تنصیب کا طریقہ پیکڈ-بیڈ کرومیٹوگرافی میڈیا کی طرح ہے۔ یقینی بنائیں کہ بہاؤ کی سمت ماڈیول پر نشان زد تیر کی پیروی کرتی ہے۔ ماڈیول Luer کنیکٹر یا کلیمپ کنیکٹر کا استعمال کرتے ہوئے منسلک کیا جا سکتا ہے.

5.1.2 انلیٹ فلو ریٹ کو 5-10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور ماڈیول سے ہوا کو صاف کرنے کے لیے ایکولبریشن بفر کا استعمال کریں۔ اس وقت تک فلشنگ جاری رکھیں جب تک کہ آؤٹ لیٹ پر کوئی بلبل نظر نہ آئے، پھر پرمیٹ آؤٹ لیٹ کو کرومیٹوگرافی سسٹم سے جوڑیں۔

5.2.:پری-استعمال کی تیاری

5.2.1: انلیٹ فلو ریٹ کو 5-10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 5 MV سے زیادہ کے لیے 0.5 M NaOH کا استعمال کرتے ہوئے پری ٹریٹمنٹ انجام دیں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ جھلی توازن تک پہنچ جائے۔

5.2.2: اسی بہاؤ کی شرح کے حالات میں، 5 MV سے زیادہ کے لیے 1 M NaCl کے ساتھ پری-علاج کریں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ جھلی توازن تک پہنچ جائے۔

5.3 کرومیٹوگرافی کا عمل

5.3.1 inlet بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/min پر سیٹ کریں اور 5 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر کے ساتھ پری-علاج کریں جب تک کہ جھلی توازن تک نہ پہنچ جائے۔

5.3.2 0.22 μm پری-فلٹریشن کے بعد، نمونے کو کالم پر لوڈ کریں اور اس وقت تک جاری رکھیں جب تک کہ پورا نمونہ لاگو نہ ہو جائے یا کرومیٹوگرافی لوڈنگ کی گنجائش پوری نہ ہوجائے۔

5.3.3 10 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر کے ساتھ اس وقت تک دھوئیں جب تک کہ UV قدر بیس لائن تک کم نہ ہو جائے۔

5.3.4 عمل کے ڈیزائن کے مطابق، گریڈینٹ ایلیوشن یا لکیری ایلیوشن سسٹم کا اطلاق کریں، اور ضرورت کے مطابق حصوں میں حصوں کو جمع کریں۔

5.4 CIP پوسٹ-علاج کا استعمال کریں – CIP (کلین-ان-جگہ میں) جھلی کرومیٹوگرافی سسٹم کے لیے۔

5.4.1 داخلی بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 1 M NaOH کے ساتھ 10 MV سے زیادہ کے لیے علاج کریں جب تک کہ UV کی قدر بیس لائن سے نیچے نہ آ جائے۔

5.4.2 گردش کرنے والی دھلائی کے 30 منٹ کے بعد، پانی سے اس وقت تک کللا کریں جب تک کہ پی ایچ 7 اور 8 کے درمیان نہ ہو، پھر 20٪ ایتھنول پر سوئچ کریں اور اس وقت تک صفائی جاری رکھیں جب تک کہ چالکتا میں کوئی تبدیلی نہ ہو۔

5.5 میمبرین کرومیٹوگرافی اسٹوریج

CIP کے استعمال اور تکمیل کے بعد، جھلی کے ماڈیول کو 20% ایتھنول میں بھگو کر ہٹایا اور ذخیرہ کیا جا سکتا ہے، یا 20% ایتھنول پر مشتمل محلول میں کمرے کے درجہ حرارت پر آن لائن ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔ 20% ایتھنول محلول کا معائنہ کیا جانا چاہیے اور اسے باقاعدگی سے تبدیل کرنا چاہیے۔

 

6، آرڈر کی معلومات

CM-قسم کا کمزور کیشن ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی کیپسول فلٹر

	لیبارٹری پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانہ	پیداوار کا پیمانہ
ماڈل	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
جھلی کا علاقہ	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: ایس پی مضبوط کیشن ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی، چین، سپلائرز، مینوفیکچررز، فیکٹری، تھوک، بلک، اسٹاک میں، مفت نمونہ