CM کمزور آئن-ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی۔

ایس پی مضبوط کیشن ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی پروڈکٹ کا تعارف 

 

2. مصنوعات کے فوائد

تیز اور موثر ہائی بائنڈنگ کی گنجائش روایتی رال کرومیٹوگرافی سے 40 گنا زیادہ تیزی سے بہاؤ کی شرح پر حاصل کی جا سکتی ہے۔ روایتی رال پر مبنی کرومیٹوگرافی کے مقابلے میں، جھلی کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے عمل کے وقت کو 30–40 گنا کم کیا جا سکتا ہے۔ عام آپریٹنگ بہاؤ کی شرح تقریباً 10 MV/منٹ ہے۔

2.2 ہائی بائنڈنگ ایفیشنسی میمبرین کرومیٹوگرافی کم پریشر ڈراپ پر ہائی بائنڈنگ صلاحیت اور اعلی بہاؤ کی شرح کو ظاہر کرتی ہے، جس سے چارج شدہ بائیو مالیکیولز کو ماڈیول کے ذریعے ایک ہی پاس میں پکڑا جا سکتا ہے۔

2.3 توسیع پذیر اور لچکدار جھلی کرومیٹوگرافی کی مصنوعات کی مکمل رینج بائیو مالیکیول پیوریفیکیشن کی مختلف ضروریات کو پورا کر سکتی ہے، جس میں عمل کی ترقی سے لے کر بڑے پیمانے پر پیداوار تک ایپلی کیشنز کا احاطہ کیا جا سکتا ہے۔ کیپسول ڈیزائن سنگل استعمال کے آپریشن کی اجازت دیتا ہے یا مناسب صفائی کے طریقہ کار کے بعد اسے صاف اور دوبارہ استعمال کیا جا سکتا ہے۔

2.4 بہتر پیداواری کمپیکٹ ڈیزائن سہولت کے نشان کو کم کرتا ہے۔ کالم پیکنگ، صفائی، صفائی کی توثیق، اور کالم اسٹوریج جیسے آپریشنز کو ختم کرکے، نسبتاً کم بفر کے ساتھ سادہ توازن کے بعد پروسیسنگ شروع ہوسکتی ہے۔ چونکہ کالم پیکنگ، صفائی، یا ذخیرہ کرنے کی کوئی ضرورت نہیں ہے، اس لیے مزدوری کے اخراجات 50% سے زیادہ کم کیے جا سکتے ہیں۔

 

 

3 تکنیکی پیرامیٹرز

3.1 ساختی مواد

	لیب پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانے	پیداوار کے پیمانے
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	140 ملی لیٹر	5L
جھلی کی حمایت کی ساخت	پولی پروپیلین
جھلی ہاؤسنگ	پولی پروپیلین
اے انگوٹھی	سلیکون

3.2 آپریٹنگ خصوصیات

	لیب پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانے	پیداوار کے پیمانے
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L
تجویز کردہ بہاؤ کی شرح	1-6 ملی لیٹر/منٹ	25-150ml/min	2-12L/منٹ	25-150L/منٹ
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ درجہ حرارت	35 ڈگری
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ دباؤ	3 بار (25 ڈگری)
زیادہ سے زیادہ دباؤ کا فرق	3 بار (25 ڈگری)
ذخیرہ کرنے کے حالات	20% eتھانولaبے ترتیبsحل

موازنہ سے پتہ چلتا ہے کہ ایس پی میمبرین کرومیٹوگرافی کی سروس لائف SP Sepharose 6FF کے مقابلے ہے۔

تصویر 1. Lysozyme کے ساتھ متعدد استعمال کے بعد ایس پی میمبرین کرومیٹوگرافی کی بائنڈنگ صلاحیت میں تبدیلی

اس کے علاوہ، ہم نے میزبان سیل پروٹین اور نیوکلک ایسڈ کو ہٹانے میں اس کی کارکردگی کے لیے جھلی کرومیٹوگرافی کا جائزہ لیا۔ نتائج درج ذیل ہیں:

	ڈی این اے				ایچ سی پی
	آئی جی جی ریکوری	RT PCR کے ذریعے مواد (IgG کا pg/mg)		ہٹانے کا عنصر	ایلیسا کا مواد (آئی جی جی کا ng/mg)		ہٹانے کا عنصر
دوڑو	%	کیو جھلی سے پہلے	کیو میمبرین کے بعد	لاگ	کیو جھلی سے پہلے	کیو میمبرین کے بعد	لاگ
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

ٹیبل 1. CHO میں DNA اور میزبان سیل پروٹین کو ہٹانے کی شرحیں

تجربات کی ایک سیریز نے یہ ثابت کیا کہ SP جھلی کرومیٹوگرافی مؤثر طریقے سے آلودگیوں کو ہٹا سکتی ہے جبکہ ہدف IgG کی اعلی بحالی کی شرح کو برقرار رکھتی ہے۔

جب درآمد شدہ برانڈز کے ساتھ Gudiling SP membrane chromatography کا موازنہ کیا جائے تو بائنڈنگ صلاحیت کے اعداد و شمار درج ذیل ہیں:

پابند کرناcصلاحیت (mg/mL)	سارٹوریئس	پال	رہنمائی کرنا
لائسوزیم	25	32	29
ٹرپسن	22	27	25

جدول 2. ہماری مصنوعات اور مسابقتی برانڈز میں مختلف پروٹینوں کی پابند صلاحیت کی کارکردگی

مجموعی تشخیص سے پتہ چلتا ہے کہ ہماری پابند کرنے کی صلاحیت درآمد شدہ مصنوعات کے مقابلے میں ہے۔

شکل 2. لائسوزیم کو معیاری کے طور پر استعمال کرتے ہوئے ایس پی میمبرین کرومیٹوگرافی ماڈیول کا بائنڈنگ کیپسٹی ٹیسٹ

متحرک بائنڈنگ کی صلاحیت اور درآمد شدہ مصنوعات کے مقابلے میں، اس بات کی تصدیق کی گئی کہ زیادہ تر ٹارگٹ پروٹین اس وقت پکڑے جا سکتے ہیں جب 190 mM NaCl میں لائسوزیم کو خارج کیا جائے۔

اخراج کے مختلف حالات کے ذریعے، ہم نے پایا کہ جھلی کرومیٹوگرافی کے ایلیوشن پروفائلز ایگروز جیل سے ملتے جلتے ہیں، لیکن پروٹین کی پاکیزگی مختلف نمک کی تعداد میں نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہے۔ اصل R&D اور پیداوار میں، اعلی-پاکیزہ ہدف پروٹین حاصل کرنے کے لیے اخراج کے بہترین حالات کا مقداری طور پر تعین کرنا ضروری ہے۔

 

4 عام درخواست کے مقدمات

ڈی این اے، وائرس، اور میزبان سیل پروٹین کو ہٹانا

پلازمیڈ، وائرس، پروٹین، اور oligonucleotides کی پاکیزگی کی گرفتاری

خمیر کے ابال کے شوربے سے روغن کو ہٹانا اور اعلی-کیپچر پروٹین کیپچر

 

5 استعمال کا طریقہ کار

5.1 سامان کی تیاری اور اسمبلی:

5.1.1: جھلی کے کرومیٹوگرافی ماڈیول کو ایک ÄKTA کرومیٹوگرافی سسٹم پر انسٹال کریں جس کے بعد رال کالموں کی طرح کے طریقہ کار پر عمل کریں، اس بات کو یقینی بناتے ہوئے کہ بہاؤ کی سمت ماڈیول کے تیروں اور انلیٹ اورینٹیشن کے ساتھ ہم آہنگ ہو۔ سسٹم میں محفوظ انضمام کے لیے Luer لاک یا کلیمپ-سٹائل کی فٹنگز کا استعمال کرتے ہوئے ماڈیول کو جوڑیں۔

5.1.2 فیڈ کے بہاؤ کی شرح کو اس پر سیٹ کریں۔5–10 MV/منٹاور توازن بفر کا استعمال کرتے ہوئے ماڈیول کو ڈیگاس کریں، اس بات کو یقینی بناتے ہوئے کہ اخراج ہوا کے بلبلوں سے پاک ہو۔ ایک بار ختم ہونے کے بعد، پرمیٹ آؤٹ لیٹ کو کرومیٹوگرافی سسٹم سے جوڑیں۔

5.2: پری-علاج کا استعمال:

5.2.1:

فیڈ کے بہاؤ کی شرح کو اس پر سیٹ کریں۔5–10 MV/منٹاور اس کے ساتھ علاج سے پہلے- انجام دیں۔5 MV سے زیادہ کے لیے 0.5 M NaOH، اس بات کو یقینی بنانا کہ جھلی مکمل توازن تک پہنچ جائے۔

5.2.2: اسی بہاؤ کی شرح پر، اس کے ساتھ پری-علاج کریں۔5 MV سے زیادہ کے لیے 1 M NaClاس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ جھلی مکمل توازن تک پہنچ جائے۔

5.3 کرومیٹوگرافی کا عمل

5.3.1 فیڈ کے بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 5 MV سے زیادہ کے لیے ایکولبریشن بفر کے ساتھ جھلی کو متوازن رکھیں، جب تک کہ جھلی مکمل توازن تک نہ پہنچ جائے۔

5.3.2 0.22 μm پری-فلٹریشن کے بعد، نمونے کو اس وقت تک جھلی پر لوڈ کریں جب تک کہ نمونہ لوڈنگ مکمل نہ ہو جائے یا کرومیٹوگرافک بائنڈنگ کی گنجائش پوری نہ ہوجائے۔

5.3.3 10 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر کے ساتھ اس وقت تک دھوئیں جب تک کہ UV سگنل بیس لائن پر واپس نہ آجائے۔

5.3.4 پروسیس ڈیزائن کے مطابق گریڈیئنٹ ایلیوشن یا سٹیپ وائز ایلوشن کا اطلاق کریں، اور حسب ضرورت فریکشن جمع کریں۔

5.4 CIP پوسٹ-علاج کا استعمال کریں – میمبرین کرومیٹوگرافی ڈیوائس CIP (جگہ میں صفائی)

5.4.1 فیڈ کے بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 1 M NaOH کے ساتھ 10 MV سے زیادہ کے لیے صفائی کریں، جب تک کہ UV سگنل بیس لائن سے نیچے نہ آ جائے۔

5.4.2 30 منٹ تک گردش کرنے کے بعد، پانی کی دھلائی پر سوئچ کریں جب تک کہ پی ایچ 7-8 تک نہ پہنچ جائے، پھر 20٪ ایتھنول کے ساتھ صفائی جاری رکھیں جب تک کہ چالکتا تقریباً مستقل نہ ہوجائے۔

5.5 میمبرین کرومیٹوگرافی اسٹوریج

CIP کے استعمال اور تکمیل کے بعد، جھلی کے ماڈیول کو 20% ایتھنول میں بھگو کر ہٹایا اور ذخیرہ کیا جا سکتا ہے، یا اسے 20% ایتھنول والے محلول میں کمرے کے درجہ حرارت پر لائن میں ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔ 20٪ ایتھنول محلول کا معائنہ کیا جانا چاہئے اور وقتا فوقتا تبدیل کیا جانا چاہئے۔

 

6. معلومات کو ترتیب دینا

Q مضبوط اینین ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی کیپسول فلٹر

	لیب پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانے	پیداوار کے پیمانے
پروڈکٹ ماڈل	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: سینٹی میٹر کمزور آئن-ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی، چین، سپلائرز، مینوفیکچررز، فیکٹری، تھوک، بلک، اسٹاک میں، مفت نمونہ