DEAE کمزور اینون ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی۔

DEAE کمزور اینون ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی - پروڈکٹ کا تعارف

 

1. جائزہ

DEAE کمزور اینون ایکسچینج کرومیٹوگرافی ایک صاف کرنے کی تکنیک ہے جو چارج کی خصوصیات اور مختلف بائیو مالیکیولز کے چارج کثافت میں فرق پر مبنی ہے۔ چونکہ زیادہ تر بائیو میکرو مالیکیولز کاربوکسیل یا ہائیڈروکسیل گروپس جیسے فنکشنل گروپس پر مشتمل ہوتے ہیں، اس لیے ان کے چارج کی خصوصیات اور شدت کو بفر محلول کے پی ایچ میں ترمیم کرکے ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔ بائیو مالیکیولز ایک مخالف چارج شدہ ایون یا کیشن ایکسچینج میڈیم سے منسلک ہونے کے بعد، موبائل فیز کی آئنک طاقت یا پی ایچ کو تبدیل کرکے علیحدگی حاصل کی جاتی ہے۔ کمزور بائنڈنگ وابستگی والے مالیکیولز کو پہلے الگ کیا جاتا ہے، اس کے بعد مضبوط پابند وابستگی والے مالیکیولز، اس طرح مؤثر علیحدگی کو پورا کرتے ہیں۔

 

2. مصنوعات کے فوائد

2.1 اعلی کارکردگی: رال پر مبنی کرومیٹوگرافی سے 40 گنا زیادہ بہاؤ کی شرح پر مضبوط پابندی حاصل کرتا ہے۔ روایتی پیکڈ-بیڈ کرومیٹوگرافی کے مقابلے میں، جھلی کی کرومیٹوگرافی مجموعی عمل کے وقت کو تقریباً 30-40 گنا کم کرتی ہے۔

2.2 ہائی بائنڈنگ ایفیشنسی: میمبرین کرومیٹوگرافی کم پریشر ڈراپ کے تحت ہائی بائنڈنگ صلاحیت اور ہائی فلو ریٹ کو ظاہر کرتی ہے، جس سے چارج شدہ بائیو مالیکیولز کو کالم میں سے ایک ہی پاس میں پکڑا جا سکتا ہے۔

2.3 توسیع پذیر اور لچکدار: جھلی کرومیٹوگرافی کی مصنوعات کی مکمل سیریز مختلف بائیو میکرومولیکول پیوریفیکیشن کی ضروریات کو پورا کر سکتی ہے، جس میں عمل کی نشوونما سے لے کر بڑے پیمانے پر پیداوار تک تمام مراحل کا احاطہ کیا جاتا ہے۔ کیپسول-قسم کا ساختی ڈیزائن ایک ہی-استعمال کے آپریشن اور صفائی کے بعد دوبارہ استعمال دونوں کو سپورٹ کرتا ہے۔

2.4 بہتر پیداوری: کمپیکٹ ڈیزائن سہولت کے نشان کو کم کرتا ہے۔ کالم کی پیکنگ، صفائی، صفائی کی توثیق، اور کالم اسٹوریج کے طریقہ کار کو ختم کرکے، نظام کو کالم پیکنگ یا اسٹوریج کے بغیر بفر توازن کے بعد براہ راست چلایا جاسکتا ہے۔ مزدوری کے اخراجات میں 50% تک کمی کی جا سکتی ہے۔

 

3. تکنیکی پیرامیٹرز

3.1 ساختی مواد

	لیبارٹری پیمانے	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانے	پیداوار کے پیمانے
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	140 ملی لیٹر	5L
جھلی کی حمایت کی ساخت	پولی پروپیلین (پی پی)
جھلی ہاؤسنگ	پولی پروپیلین (پی پی)
اے انگوٹھی	سلیکون

3.2 آپریٹنگ خصوصیات

	لیبارٹری پیمانے	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانے	پیداوار کا پیمانہ
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L
تجویز کردہ بہاؤ کی شرح	1-6 ملی لیٹر/منٹ	25-150ml/min	2-12L/منٹ	25-150L/منٹ
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ درجہ حرارت	35 ڈگری
زیادہ سے زیادہ آپریٹنگ دباؤ	3 بار (25 ڈگری)
زیادہ سے زیادہ تفریق دباؤ	3 بار (25 ڈگری)
ذخیرہ کرنے کے حالات	20%乙醇水溶液 20% ایتھنول آبی محلول

شکل 1. BSA کے ساتھ متعدد استعمال کی نگرانی کے بعد جھلی کی کرومیٹوگرافی لوڈ کرنے کی صلاحیت میں تبدیلیاں۔

مزید برآں، ہم نے DEAE جھلی کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے میزبان سیل پروٹین اور نیوکلک ایسڈز کو ہٹانے کی کارکردگی کا جائزہ لیا۔ نتائج درج ذیل ہیں۔

	ڈی این اے				ایچ سی پی
	آئی جی جی ریکوری	RT PCR کے ذریعے مواد (IgG کا pg/mg)		ہٹانے کا عنصر	ایلیسا کا مواد (آئی جی جی کا ng/mg)		ہٹانے کا عنصر
دوڑو	%	DEAE جھلی سے پہلے	DEAE جھلی کے بعد	لاگ	DEAE جھلی سے پہلے	DEAE جھلی کے بعد	لاگ
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

ٹیبل 1. CHO-سے DNA اور میزبان سیل پروٹین کو ہٹانے کی شرح DEAE میمبرین کرومیٹوگرافی کا استعمال کرتے ہوئے IgG کا اظہار کرتی ہے۔

تجربات کی ایک سیریز نے یہ ثابت کیا کہ Q میمبرین کرومیٹوگرافی مؤثر طریقے سے نجاست کو دور کر سکتی ہے، جبکہ ہدف IgG کی بحالی کی بلند شرح کو برقرار رکھتی ہے۔

اس کے علاوہ، ہم نے درآمد شدہ برانڈز کے ساتھ گوڈیلنگ میمبرین کرومیٹوگرافی کا موازنہ کیا، اور لوڈنگ کی صلاحیت کا ڈیٹا درج ذیل ہے۔

شکل 2. ہماری جھلی کرومیٹوگرافی اور حریف مصنوعات پر مختلف پروٹینوں کی لوڈنگ کارکردگی

مجموعی تشخیص سے پتہ چلتا ہے کہ ہماری لوڈنگ کی صلاحیت درآمد شدہ مصنوعات کے مقابلے میں ہے۔

شکل 3. کولیجن پروٹین ٹیسٹنگ میں DEAE جھلی کرومیٹوگرافی ماڈیول کی کارکردگی

DEAE جھلی کرومیٹوگرافی ماڈیول کا استعمال کرتے ہوئے، توثیق کے نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ زیادہ تر ٹارگٹ کولیجن پروٹین کو 135 mM NaCl کا استعمال کرتے ہوئے پکڑا جا سکتا ہے۔

مختلف الیشن حالات کے تحت جانچ کے ذریعے، ہم نے پایا کہ جھلی کی کرومیٹوگرافی اور ایگرز جیل کرومیٹوگرافی اسی طرح کے اخراج کے رویے کو ظاہر کرتی ہے، جہاں نمک کی مختلف تعداد میں پروٹین کی پاکیزگی نمایاں طور پر مختلف ہوتی ہے۔ عملی R&D اور پیداوار میں، اعلی- طہارت کے ہدف والے پروٹین حاصل کرنے کے لیے زیادہ سے زیادہ توازن کے اخراج کے حالات کا مقداری طور پر تعین کرنا ضروری ہے۔

 

4. کلاسیکی درخواست کے مقدمات

ڈی این اے، وائرس، میزبان سیل پروٹین اور اینڈوٹوکسین کو ہٹانا

پلازمیڈ، وائرس، نیوکلک ایسڈ، اور پروٹین کی گرفتاری کے ساتھ ساتھ oligonucleotides کی پاکیزگی

 

5. آپریٹنگ ورک فلو

5.1: سامان کی تیاری اور اسمبلی

5.1.1 میمبرین کرومیٹوگرافی ماڈیول کو AKTA کرومیٹوگرافی سسٹم پر پیکڈ رال کالموں کی طرح نصب کیا جانا چاہئے، اس بات کو یقینی بناتے ہوئے کہ بہاؤ کی سمت تیروں اور داخلی سمت کے ساتھ ہم آہنگ ہو۔ Luer کنیکٹرز یا کلیمپ فٹنگز کا استعمال کرتے ہوئے جڑیں۔

5.1.2 داخلی بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور ہوا کو صاف کرنے کے لیے توازن بفر کا استعمال کریں۔ اس وقت تک فلشنگ جاری رکھیں جب تک آؤٹ لیٹ پر کوئی بلبل نظر نہ آئے، پھر پرمییٹ آؤٹ لیٹ کو کرومیٹوگرافی سسٹم سے جوڑیں۔

5.2:علاج سے پہلے-استعمال کریں۔

5.2.1: انلیٹ فلو ریٹ کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 5 MV سے زیادہ کے لیے 0.5 M NaOH کے ساتھ پری-علاج کریں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ جھلی توازن تک پہنچ جائے۔

5.2.2: اسی بہاؤ کی شرح کے تحت، مزید پری-5 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر (1× PBS) کے ساتھ علاج کریں تاکہ یہ یقینی بنایا جا سکے کہ جھلی توازن تک پہنچ جائے۔

5.3 کرومیٹوگرافی کا عمل

5.3.1

داخلی بہاؤ کی شرح کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 5 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر کے ساتھ پری-علاج کریں جب تک کہ جھلی توازن تک نہ پہنچ جائے۔

5.3.2

0.22 μm فلٹر کے ذریعے نمونے کو پہلے سے-فلٹر کرنے کے بعد، لوڈنگ مکمل ہونے یا کرومیٹوگرافی لوڈنگ کی گنجائش تک پہنچنے تک نمونے کو لوڈ کریں۔

5.3.3

10 MV سے زیادہ کے لیے توازن بفر کے ساتھ اس وقت تک دھوئیں جب تک کہ UV جذب بنیادی سطح تک کم نہ ہو جائے۔

5.3.4

عمل کے ڈیزائن کے مطابق گریڈینٹ ایلیوشن یا لکیری ایلیوشن کا استعمال کریں، اور ضرورت کے مطابق مختلف حصوں میں نمونے جمع کریں۔

5.4، CIP پوسٹ-علاج کا استعمال کریں - جھلی کرومیٹوگرافی ڈیوائس کا CIP

5.4.1

انلیٹ فلو ریٹ کو 5–10 MV/منٹ پر سیٹ کریں اور 10 MV سے زیادہ کے لیے 0.5 M NaOH کے ساتھ-ان-جگہ (CIP) ٹریٹمنٹ کی صفائی کریں جب تک کہ UV جذب بیس لائن سے نیچے نہ آ جائے۔

5.4.2

دھونے کو 30 منٹ تک گردش کرنے کے بعد، پانی سے دھونے پر سوئچ کریں جب تک کہ پی ایچ 7-8 کے درمیان نہ ہو، پھر 20٪ ایتھنول کے ساتھ صفائی جاری رکھیں جب تک کہ چالکتا تقریباً مستقل نہ رہے۔

5.5، جھلی کرومیٹوگرافی اسٹوریج:

CIP کے استعمال اور تکمیل کے بعد، جھلی کے ماڈیول کو 20% ایتھنول میں بھگو کر ہٹایا اور ذخیرہ کیا جا سکتا ہے، یا کمرے کے درجہ حرارت پر 20% ایتھنول محلول میں آن لائن ذخیرہ کیا جا سکتا ہے۔ 20٪ ایتھنول محلول کا معائنہ کیا جانا چاہئے اور وقتا فوقتا تبدیل کیا جانا چاہئے۔

 

6. معلومات کو ترتیب دینا

DEAE-قسم کا کمزور ایون ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی کیپسول فلٹر

	لیبارٹری-پیمانہ	چھوٹے پیمانے پر	پائلٹ پیمانہ	پیداوار کا پیمانہ
پروڈکٹ ماڈل	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
جھلی کا حجم	0.2 ملی لیٹر	5 ملی لیٹر	400 ملی لیٹر	5L

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: ڈی ای ای کمزور ایون ایکسچینج میمبرین کرومیٹوگرافی، چین، سپلائرز، مینوفیکچررز، فیکٹری، تھوک، بلک، اسٹاک میں، مفت نمونہ