مناسب الٹرا فلٹریشن ٹیوب کا انتخاب کیسے کریں۔

الٹرا فلٹریشن ٹیوبیں جو عام طور پر پروٹین کے ارتکاز اور بفر کی تبدیلی کے لیے استعمال ہوتی ہیں اکثر الٹرا فلٹریشن ٹیوبوں میں استعمال ہوتی ہیں۔ دیگر ماڈلز ہیں، جن میں مختلف حجم کے سائز اور الٹرا فلٹریشن ٹیوبیں ہیں، جو ہدف پروٹین کے مالیکیولر وزن، ارتکاز سے پہلے والیوم اور ارتکاز کے ہدف کے حجم پر منحصر ہے۔ دوبارہ قابل استعمال۔

1. ایک مناسب الٹرا فلٹریشن ٹیوب کا انتخاب کریں، بنیادی طور پر MWCO اور ارتکاز والیوم کو مدنظر رکھتے ہوئے۔ عام طور پر، سالماتی وزن ہدف پروٹین کے مالیکیولر وزن کے 1/3 سے زیادہ نہیں ہونا چاہیے۔ اگر ہدف پروٹین کا مالیکیولر وزن تقریباً 10 kd ہے تو ایک الٹرا فلٹریشن ٹیوب استعمال کی جا سکتی ہے جس کا سالماتی وزن 3 KD برقرار رکھا ہوا ہو۔

2. نئی خریدی گئی الٹرا فلٹریشن خشک ہے۔ استعمال سے پہلے ملیک پانی شامل کریں۔ پانی مکمل طور پر جھلی سے گزرتا ہے اور اسے برف کے غسل یا ریفریجریٹر میں چند منٹ کے لیے پہلے سے ٹھنڈا کیا جاتا ہے۔ پھر پروٹین کے محلول کو شامل کرنے کے لیے پانی ڈالیں۔ پروٹین محلول کی مقدار ٹیسٹ ٹیوب کے اوپری حصے پر سفید لکیر سے زیادہ نہیں ہونی چاہیے۔ آسان آپریشن۔ پروٹین کے محلول کو شامل کرنے سے پہلے، الٹرا فلٹریشن ٹیوب کو پری کولنگ کے لیے برف میں ڈالنے کی ضرورت ہے۔

3. توازن۔ کشش ثقل کا کمیت اور مرکز متوازن ہونا چاہیے۔ نوٹ کریں کہ رفتار اور سرعت زیادہ تیز نہیں ہونی چاہیے، ورنہ الٹرا فلٹریشن جھلی کو براہ راست نقصان پہنچے گا۔ سینٹرفیوگل الٹرا فلٹریشن شروع کریں (سنٹری فیوج کو 4 ڈگری پر ٹھنڈا کرنا)۔ ڈایافرام کی سمت اور گھومنے والی شافٹ کو ہدایات کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے (زاویہ سینٹری فیوج کی صورت میں، ڈایافرام شافٹ پر کھڑا ہوتا ہے)۔ اصل استعمال میں، عام رفتار دستی میں بتائی گئی رفتار سے کم ہے، جو سینٹری فیوگل پائپ کی سروس لائف کو طول دے سکتی ہے۔

4. جب بقیہ 1ml پر مرتکز ہو جائیں، [50ul گھریلو بریڈ فورڈ محلول لیں، 10ul سیال شامل کریں تاکہ یہ دیکھیں کہ آیا یہ نیلا ہو جاتا ہے، اور معلوم کریں کہ آیا الٹرا فلٹریشن ٹیوب پروٹین کو لیک کرتی ہے۔ اگر ٹیوب لیک ہو جائے تو اسے اوپری تہہ میں ڈالیں اور پھر الٹرا فلٹریشن شروع کرنے کے لیے نئی ٹیوب میں واپس جائیں۔ درست طریقے سے اس بات کا تعین کرنے کے لیے کہ آیا ٹیسٹ ٹیوب لیک ہو رہی ہے، براہ کرم 5mg 10min سینٹری فیوج 10min، پھر اس سے گزریں، پروٹین جیل یا بریڈ فورڈ [موٹی پیمائش] چلائیں۔ باقی پروٹین محلول کو توجہ مرکوز کرنے کے لیے شامل کرنا جاری رکھیں (پروٹین کو گرم کرنے سے روکنے کے لیے برف پر چلائیں) جب تک کہ تمام مرتکز محلول شامل نہ ہوجائیں۔ سینٹرفیوگریشن کے دوران، اس بات پر توجہ دیں کہ آیا پروٹین کی بارش ہوتی ہے اور ٹیوب میں رکاوٹ پیدا ہوتی ہے۔ اگر بارش ہوتی ہے، تو براہ کرم ورن کی مخصوص وجہ کا تعین کریں، آیا پروٹین کی مقدار بہت زیادہ ہے یا بفر نامناسب ہے۔ ارتکاز کو کم کرنے کے لیے ایک ہی وقت میں متعدد الٹرا فلٹریشن ٹیوبوں کے استعمال سے پہلے کو حل کیا جا سکتا ہے، جب کہ مؤخر الذکر مختلف بفرز کو تبدیل کر سکتا ہے جب تک کہ پروٹین کی کمی نہ ہو جائے۔

5. پچھلے مراحل پروٹین کو مرکوز کرنے کے لیے استعمال کیے جاتے ہیں۔ اگر بفر کو تبدیل کرنا ہے، جب کل ​​پروٹین محلول تقریباً 1ml تک مرتکز ہو جائے تو آہستہ سے ایک نیا بفر شامل کریں (0.22um الٹرا فلٹریشن جھلی کے ذریعے الٹرا فلٹریشن)، اور پھر مسلسل تین بار تقریباً 1ml تک مرتکز کریں، لہذا کہ حتمی ارتکاز کا انحصار ضروری پروٹین کے ارتکاز پر ہوتا ہے، جو عام طور پر 500ul سے زیادہ یا 200ul سے کم نہیں ہوتا ہے۔ ہر بار کم از کم 10 بار کے حجم کے ارتکاز کے مطابق، یہ تین گنا سے 1000 گنا زیادہ ہے، جو بنیادی طور پر بفر کو تبدیل کرنے کا مقصد حاصل کر سکتا ہے۔

6. حتمی پروٹین کی مقدار کو ہٹا دیں۔ برف پر کام کریں۔ پیلے رنگ کے پائپٹ ٹپ (200ul) کا استعمال کرتے ہوئے، آہستہ سے پائپیٹ کی نوک کو کنارے کے ساتھ داخل کریں، پھر آہستہ سے پھونک ماریں اور پروٹین کے محلول کو مکس کریں۔ محتاط رہیں کہ الٹرا فلٹریشن جھلی کو ہاتھ نہ لگائیں۔ ہر بار 200ul تک مرتکز محلول کو چوسیں جب تک کہ یہ مکمل طور پر چوسا نہ جائے۔ ٹیسٹ ٹیوب کے نچلے حصے میں آخری مرتکز محلول نکالنا ضروری نہیں ہے، ورنہ یہ بہت مشکل ہے اور الٹرا فلٹریشن جھلی کو نقصان پہنچ سکتا ہے۔ آخر میں، ملیق پانی کو الٹرا فلٹریشن جھلی سے گزرے بغیر الٹرا فلٹریشن ٹیوب میں شامل کیا جاتا ہے تاکہ پانی کی کمی اور جھلی کے خشک ہونے سے بچا جا سکے۔

7. الٹرا فلٹریشن ٹیوب کے علاج اور الٹرا فلٹریشن ٹیوب کو دوبارہ استعمال کرنے کے لیے درج ذیل اقدامات ہیں۔

8. الٹرا فلٹریشن ٹیوب میں پانی ڈالیں اور کئی بار ملیق پانی سے آہستہ سے دھو لیں۔ [اگر ٹیسٹ ٹیوب کے نچلے حصے میں واضح پروٹین کی بارش ہو تو آپ پہلے پانی ڈال سکتے ہیں اور پھر اسے پائپیٹ سے اڑا سکتے ہیں۔ ہوشیار رہیں کہ جھلی کو نہ چھوئے۔ تلچھٹ نیچے لٹکتی ہے اور پھر بھاگ جاتی ہے۔ آپ اسے نلکے کے پانی سے نہیں نکال سکتے۔ 0.2m NaOH محلول شامل کرنے کے بعد، اسے کمرے کے درجہ حرارت پر 20 منٹ کے لیے رکھیں، اور اس دوران الٹرا فلٹریشن ٹیوب کو متوازن رکھیں۔ مزید 10 منٹ کے لیے سینٹری فیوج کریں۔ بقیہ NaOH محلول کو انڈیلیں اور روئی کے کور کو بیکر (1 یا 2L) ملیق پانی میں ڈبو دیں، جسے کئی گھنٹوں کے لیے رکھا گیا، اور پھر نئے پانی سے تبدیل کر کے، NaOH کے ارتکاز کو مسلسل کمزور کرنے کے لیے کئی گھنٹوں تک رکھا گیا۔ 50ml ٹیسٹ ٹیوب کو دھوئیں اور نلکے کے پانی سے ڈھانپیں، اور اندرونی دیوار کو ملیق پانی سے دھو لیں۔

9. ڈوبی ہوئی ٹیسٹ ٹیوب کور کو نکالیں، اسے پورے ملیق پانی میں شامل کریں، اور پھر 50 ملی لیٹر ٹیسٹ ٹیوب کو ملیق پانی سے بھریں۔ آہستہ آہستہ ٹیوب کور کو 50 ملی لیٹر میں ڈالیں۔

سینٹری فیوج ٹیوب، پانی نکالیں اور تقسیم کریں، پھر اگلے استعمال تک 4 ڈگری پر ڈھک کر اسٹور کریں۔ عام طور پر، مندرجہ بالا اقدامات اور احتیاطی تدابیر کے مطابق، ہر ٹیوب تین یا چار سال میں نہیں ٹوٹے گی۔