ڈی ٹی پی ویکسین کی تیاری کے عمل میں الٹرا فلٹریشن کا اطلاق

کی درخواستUمیں ltrafiltrationProductionPکی rocessڈی ٹی پی Vacine

 

1. ڈی ٹی پی ویکسین

Pertussis، جسے عام طور پر کالی کھانسی کے نام سے جانا جاتا ہے، ایک شدید سانس کی متعدی بیماری ہے جو Bordetella pertussis کی وجہ سے ہوتی ہے، جو بنیادی طور پر شیر خوار اور چھوٹے بچوں کو متاثر کرتی ہے۔ یہ سانس کی بوندوں کے ذریعے پھیلتا ہے اور اس کی انکیوبیشن مدت 7 سے 10 دن ہوتی ہے۔ مریض میں تھوک کے جمع ہونے کی علامات پیدا ہوں گی، بشمول کھانسی۔ ڈفتھیریا ایک شدید سانس کی نالی کا انفیکشن ہے جو Corynebacterium diphtheriae کی وجہ سے ہوتا ہے۔ یہ بیکٹیریا ناک کی میوکوسا یا گلے پر حملہ کرتے ہیں، پھیلتے ہیں، خارجی زہر پیدا کرتے ہیں اور مقامی سوزش اور ٹشو نیکروسس کا سبب بنتے ہیں۔ ٹیٹنس، کلوسٹریڈیم ٹیٹانی کی وجہ سے، جلد یا چپچپا جھلی کے زخموں کے ذریعے انسانی جسم میں داخل ہوتا ہے۔ یہ انیروبک حالات میں پروان چڑھتا ہے اور ٹاکسن پیدا کرتا ہے، جس سے اسپاسموڈک پٹھوں کے سنکچن پیدا ہوتے ہیں۔

ڈی ٹی پی ویکسین ایک امتزاج ویکسین ہے جس میں بورڈٹیلا پرٹیوسس، ڈفتھیریا ٹاکسن، اور ٹیٹنس ٹاکسن کے موثر اجزاء شامل ہوتے ہیں جو مخصوص تناسب میں ملا کر ایلومینیم ہائیڈرو آکسائیڈ کے ساتھ جذب کیا جاتا ہے۔ یہ تین بیماریوں کو روکنے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے: خناق، خناق اور تشنج۔

 

2. ڈی ٹی پی ویکسین کی پیداوار کا عمل

ڈی ٹی پی ویکسین عام طور پر ایک غیر فعال ویکسین ہے۔ ڈی ٹی پی ویکسین کی تیاری بنیادی طور پر حفاظتی وجوہات کی بناء پر غیر فعال ویکسین کی تیاری کے عمل کی پیروی کرتی ہے۔ فی الحال، چین میں ڈی ٹی پی ویکسین کی تیاری کا عمل بڑی حد تک 1970 اور 1980 کی دہائی میں ٹیکنالوجی پر مبنی ہے۔ تاہم، اس پورے عمل میں، ڈائیلاسز کے مراحل میں بہت زیادہ روایتی فلٹریشن مراحل شامل تھے، جس سے مصنوعات کے مجموعی پیداواری عمل پر نمایاں اثر پڑتا ہے۔ کھلے چینلز کے ساتھ ٹینجینٹل فلو میمبرین فلٹریشن پروڈکٹس حیاتیاتی مصنوعات کے بہاو کی علیحدگی میں فوائد پیش کرتے ہیں، جیسے کم قینچ کی قوتیں اور اعلی بحالی کی شرح۔ یہ خاص طور پر اعلیٰ ارتکاز، اعلی viscosities، اور اعلی ذرہ مواد کے ساتھ نمونوں کی علیحدگی کے لیے موزوں ہیں، جو انہیں DTP ویکسینز کی تیاری کے عمل کے لیے موزوں بناتے ہیں۔

3. سیل فری ڈی ٹی پی کمبائنڈ ویکسین اینٹیجن مائع کے پیوریفیکیشن کے عمل میں ہولو فائبر الٹرا فلٹریشن ٹیکنالوجی کا اطلاق

(1) مواد اور طریقے

① نمونہ

آلودگی سے پاک اور بہتر سیل فری ڈی ٹی پی اینٹیجن محلول (اس کے بعد اسے ڈیکونٹامینٹڈ اینٹیجن محلول کہا جاتا ہے)۔

②مین ری ایجنٹس اور آلات

انجکشن گریڈ پانی؛ سوڈیم کلورائد (دواسازی کا درجہ)؛ ڈائلیسس بیگ؛ 10kDa کھوکھلی فائبر؛ peristaltic پمپ.

③ سیل فری ڈی ٹی پی اینٹیجن مائع کی الٹرا فلٹریشن اور پیوریفیکیشن

سب سے پہلے، 10kDa کے کھوکھلے ریشے کا استعمال کرتے ہوئے ابتدائی حجم کو تقریباً 5- گنا کرنے کے لیے آلودگی سے پاک اینٹیجن محلول کو مرکوز کریں۔ اس کے بعد، فلٹریشن اور دھونے کا عمل شروع کریں۔ اس کے بعد، جب فلٹریشن کا حجم ابتدائی حجم سے تقریباً 4 سے 5 گنا تک پہنچ جائے تو فلٹریشن بند کر دیں۔ آخر میں، پورے نظام کو کللا کریں اور فزیولوجیکل نمکین کے 1- گنا حجم کا استعمال کرتے ہوئے فلٹریٹ کو بازیافت کریں۔

④ڈائلیسز اور سیل فری ڈی ٹی پی اینٹیجن مائع کی صفائی

جراثیم سے پاک اینٹیجن محلول کو ڈائیلاسز بیگز میں پیک کریں اور اسے 0.85% جراثیم سے پاک سوڈیم کلورائیڈ محلول میں ڈبو دیں اور پھر 2-8 ڈگری پر ڈائیلاسز کریں۔

⑤پیوریفائیڈ مائع کی شناخت

متناسب طور پر الٹرا فلٹریشن اور ڈائلیسس سے بازیافت ہونے والے مائع کے نمونوں کو پیوریفیکیشن کے حجم میں بحال کریں۔ کنٹرول کے طور پر آلودگی سے پاک اینٹیجن محلول کا استعمال کریں اور 12% SDS-PAGE کا استعمال کرتے ہوئے نمونوں کی پاکیزگی کا تجزیہ کریں۔ حل میں ٹھوس مواد کی پیمائش کریں اور 15 منٹ کے لیے 10،000 rpm پر نمونوں کو سینٹرفیوگ کرنے کے بعد بحالی کی شرح کا حساب لگائیں۔

نتائج

①ہلو فائبر الٹرا فلٹریشن ارتکاز اور دھلائی

الٹرا فلٹریشن ارتکاز کے عمل کے دوران، 70 منٹ کے اندر 4,800 mL فلٹریٹ حاصل کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں 5- گنا ارتکاز ہوتا ہے۔ 42 LMH (69.6 mL/min) کی اوسط فلٹریشن کی شرح کے ساتھ، فلٹریشن کی شرح مسلسل کم ہوتی جاتی ہے۔ دھونے کے عمل کے دوران، 90 منٹ کے اندر 5,300 ملی لیٹر فلٹریٹ حاصل کیا جاتا ہے، جس کے نتیجے میں 4۔{11}}فولڈ واشنگ، اور فلٹریشن کی شرح مسلسل کم ہوتی جاتی ہے، جس کی اوسط فلٹریشن کی شرح 36 LMH (59.5 mL/min) ہوتی ہے۔ آخر میں، پورے سسٹم کو 1,200 ملی لیٹر فزیولوجیکل نمکین سے دھوئیں، اور کللا کے حل کو پچھلے واش محلول (1,200 ملی لیٹر) کے ساتھ ملا دیں۔ مائع کا حتمی ارتکاز عنصر 2۔{20}}گنا ہے۔ الٹرا فلٹریشن کے مقابلے میں، ڈائلیسس کے لیے ڈائیلیسیٹ کو پانچ بار تبدیل کرنا پڑتا ہے اور اس میں تقریباً 6 دن لگتے ہیں۔

②پیوریفائیڈ مائع کی شناخت

SDS-PAGE تجزیہ سے یہ بات سامنے آئی ہے کہ الٹرا فلٹریشن اور ڈائیلاسز دونوں طریقوں سے پاک ہونے والے سیل فری ڈی ٹی پی ویکسین اینٹیجن مائع کی پاکیزگی نسبتاً غیر تبدیل شدہ رہتی ہے، جیسا کہ نیچے دی گئی تصویر میں دکھایا گیا ہے۔ الٹرا فلٹریشن پیوریفیکیشن کی بازیابی کی شرح ڈائلیسس پیوریفیکیشن کے مقابلے میں قدرے کم ہے، جیسا کہ نیچے دی گئی جدول میں اشارہ کیا گیا ہے۔

نمونہ	ٹھوس مواد (%)	شرح اصولی(٪)
جراثیم کش اینٹیجن حل	0.872	/
الٹرا فلٹریشن سے بازیافت مائع (کم کیا گیا)	0.803	92.1
ڈائیلاسز سے بازیافت شدہ مائع (کم کیا گیا)	0.813	93.2

 

نتیجہ

کھوکھلی فائبر الٹرا فلٹریشن ایک جھلی سے علیحدگی کی ٹیکنالوجی ہے جو بڑے مالیکیولر مادوں کی علیحدگی، ارتکاز اور صاف کرنے کے لیے خوراک، ابال، دواسازی، ماحولیاتی تحفظ، اور کیمیائی انجینئرنگ جیسی صنعتوں میں وسیع پیمانے پر استعمال ہوتی ہے۔ اس تجربے میں، کھوکھلی فائبر الٹرا فلٹریشن ٹیکنالوجی کو استعمال کیا گیا تاکہ ڈیکونٹمینیٹڈ سیل فری ڈی ٹی پی اینٹیجن محلول کو صاف کیا جا سکے۔ تجربہ کار نے صاف کرنے کی کارکردگی اور بحالی کی شرح کے لحاظ سے روایتی ڈائیلاسز کا موازنہ کیا۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ الٹرا فلٹریشن ڈیٹاکسفائنگ ایجنٹوں اور روغن کو ہٹانے میں زیادہ کارکردگی رکھتی ہے (ڈائیلیسس کے لیے 5-7 دنوں کے مقابلے میں 3 گھنٹے کے اندر حاصل کیا جا سکتا ہے) اور اس کی بازیابی کی شرح زیادہ تھی۔ یہ تجویز کرتے ہیں کہ سیل فری ڈی ٹی پی ویکسین اینٹیجن مائع کی الٹرا فلٹریشن پیوریفیکیشن کے لیے ہولو فائبر کا استعمال ممکن ہے۔ یہ موجودہ ڈائلیسس کے عمل کو بدل سکتا ہے۔