مونوکلونل اینٹی باڈی ڈاون اسٹریم پروسیس کی وائرس کی صفائی کی صلاحیت پر مطالعہ

سیل لائنوں سے اخذ کردہ بائیوٹیکنالوجی پروڈکٹس کو وائرس کی آلودگی کا خطرہ ہو سکتا ہے - اس کی حد کئی عوامل پر منحصر ہے، بشمول تیاری کا ذریعہ، استعمال شدہ خام مال، پیداواری نظام، پیوریفیکیشن ری ایجنٹس اور ایکسپیئنٹس۔ مینوفیکچرنگ کے عمل میں وائرسوں کو ہٹانے یا غیر فعال کرنے کا مطالعہ پیتھوجینک وائرسوں کی iatrogenic منتقلی کے امکانات کو کم کرنے اور اس طرح خطرے کو کم کرنے کے لیے ایک اہم قدم ہے، جو مصنوعات کی حفاظت کے لیے ضروری ہے۔ اس سے پہلے کہ حیاتیاتی مصنوعات کلینیکل ٹرائلز میں داخل ہو سکیں اور ان کی مارکیٹنگ کی جائے، ان کی پیداواری عمل کو معلوم اور فرض شدہ وائرسوں کو ہٹانے کی صلاحیت کا مظاہرہ کرنا چاہیے۔

 

01 مونوکلونل اینٹی باڈی پروڈکٹ وائرس سیفٹی اسسمنٹ

وائرس کو ہٹانے کی صلاحیت پر تحقیق عام طور پر مختلف پیداواری مراحل پر درمیانی مصنوعات میں معروف ٹائٹر انڈیکیٹر وائرس کو شامل کرکے، پھر ایک مخصوص عمل کے ذریعے علاج کیے گئے نمونے میں بقایا وائرس ٹائٹر کا تعین کرکے، اور آخر میں لاگ کمی کی قدر (LRV) کا جائزہ لے کر ہوتی ہے۔ وائرس ٹائٹر کے. 4log10 سے زیادہ یا اس کے برابر LRV کے لیے عمل کے اقدامات کو عام طور پر وائرس کے خاتمے کے مؤثر اقدامات تصور کیا جاتا ہے۔ LRV کے ساتھ عمل<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.

مصنوعی پیداواری عمل (کم عمل) کا طریقہ استعمال کرتے وقت، جہاں تک ممکن ہو، اصل پیداواری عمل، خاص طور پر موثر پیداواری عمل کے اقدامات سے متعلق ایک معقول وائرس ہٹانے/غیر فعال کرنے کی تحقیق اور جانچ کے منصوبے کو ڈیزائن کرنا ضروری ہے۔ مصنوعی عمل کو ٹیسٹ کے پیرامیٹرز اور کنٹرول کے حالات کے لحاظ سے اصل عمل کے ساتھ سختی سے ہم آہنگ ہونا چاہیے۔

 

02 عام طور پر وائرس اور تصدیقی اسکیموں کی نشاندہی کرتا ہے۔

عام اشارے والے وائرس ٹیبل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔

تحقیقاتی نیو ڈرگ ایپلی کیشن (IND) مرحلے پر، ایک بائیوٹیک پروڈکٹ کو کم از کم 2 ماڈل وائرسز کے لیے وائرل کلیئرنس اسٹڈیز کی ضرورت ہوتی ہے، عام طور پر ایک ریٹرو وائرس (X-MuLV) اور ایک پاروو وائرس (MMV) کا انتخاب کرنا۔ بائیولوجکس لائسنس کی درخواست (BLA) مرحلے کے دوران، وائرس کو ہٹانے کے مطالعے عام طور پر 3-5 مخصوص/غیر مخصوص وائرسز کا استعمال کرتے ہوئے کیے جاتے ہیں اور 3-5 پروسیس کے مراحل کا جائزہ لیا جاتا ہے تاکہ یہ ثابت کیا جا سکے کہ پروڈکٹ میں ایک مناسب حفاظتی عنصر موجود ہے۔ وائرس کی حفاظت کا نقطہ نظر. اندرون اور بیرون ملک مختلف رہنما خطوط کی وجہ سے، اعلانات کے لیے استعمال کیے جانے والے وائرس کلیئرنس کی تصدیق کے اقدامات میں کچھ فرق ہیں۔ ایم اے بی کی پیداوار کے عمل میں عام طور پر استعمال ہونے والی وائرس کلیئرنس کی تصدیق کی اسکیمیں ٹیبل 2 میں دکھائی گئی ہیں۔

 

03 بہاوی عمل کی وائرس کو ہٹانے کی صلاحیت

3.1 مختلف وائرسوں کو ہٹانے کے لیے بہاو کے عمل کی صلاحیت

2009 تک، مونوکلونل اینٹی باڈی پروڈکٹس جو IND اور BLA کے لیے FDA کو جمع کرائے گئے، پروٹین A affinity chromatography، Low pH، anion ایکسچینج کرومیٹوگرافی AEX (فلو پینیٹریشن موڈ)، کیشن ایکسچینج کرومیٹوگرافی CEX (بائنڈنگ - ایلیوشن موڈ)، اور وائرس کلیئرنس کی توثیق کو چھوڑ کر۔ وائرس فلٹریشن سب سے زیادہ استعمال ہونے والے انڈیکیٹر وائرس فیملیز ہیں اور ان کا مطلب اور رینج کلیئرنس اثرات شکل 1 میں دکھائے گئے ہیں۔

ریٹرو وائرس کے لیے، CEX کے استثناء کے ساتھ، جس کا LRV تقریباً 3log10 ہے (جیسا کہ شکل 1 میں A-bar چارٹ میں دکھایا گیا ہے)، دیگر عمل مضبوط تھے (LRV 4log10 سے بڑا یا اس کے برابر)۔ ہرپیس وائرس اور ریٹرو وائرس ایک جیسے کلیئرنس اثرات رکھتے ہیں اور LRV > 4log10 (جیسا کہ شکل 1 میں بی بار چارٹ میں دکھایا گیا ہے)۔ چھوٹے غیر محیط وائرس، جیسے پاروو وائرس، کو مؤثر طریقے سے ہٹانا زیادہ مشکل ہوتا ہے، کیمیائی علاج کے خلاف مزاحم ہوتے ہیں، اور فلٹرز کے ذریعے آسانی سے نہیں پھنستے ہیں (شکل 1 میں سی بار چارٹ میں دکھایا گیا ہے)۔ parvoviridae (اوسط LRV> 4log10) کو ہٹانے میں صرف AEX اور چھوٹے وائرس فلٹرز کارگر تھے۔

شکل 1 میں دکھائے گئے عمل ہیں ProteinA، AEX (فلو پینیٹریشن موڈ)، CEX (concomitation-elution mode)، کم pH inactivation ("نامکمل" بمقابلہ "مکمل" ہٹانا)، اور بڑے اور چھوٹے یپرچر ڈیوائرس فلٹریشن۔

 

3.2 وائرس کو ہٹانے کی صلاحیت پر بہاو کے عمل کے عوامل کو متاثر کرنا

ہر عمل کے لیے LRV قدروں کی تقسیم تصویر 2 میں دکھائی گئی ہے۔ 0 ~ 21og10 والے مطالعات کو کم LRV گروپ کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا، اور 6log10 سے زیادہ والے مطالعات کو تقابلی تجزیہ کے لیے اعلی LRV گروپ کے طور پر درجہ بندی کیا گیا تھا۔

 

3.2.1 پروٹین اے وابستگی کرومیٹوگرافی۔

پروٹین اے پروسیس کی LRV ویلیو اور بیلنس/واش بفر، فلر، ایلیونٹ کمپوزیشن اور ایلیوشن پی ایچ ویلیو کے درمیان کوئی خاص تعلق نہیں تھا۔ کم LRV گروپ کا عام فرق یہ ہے کہ فیڈ اسٹاک کافی پیچیدہ ہے، اور یہ ہوسکتا ہے کہ فیڈ اسٹاک اور فلر کا پیچیدہ تعامل کرومیٹوگرافک کالم کی وائرس کو ہٹانے کی صلاحیت کو منفی طور پر متاثر کرے۔

 

3.2.2 AEX (موڈ کے ذریعے بہاؤ)

سٹراس وغیرہ۔ ظاہر ہوا کہ AEX نمونوں کی pH اور چالکتا LRV کو متاثر کر سکتی ہے۔ تاہم، Miesegaes et al کے شماریاتی نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ، ProteinA کی طرح، AEX کے LRV کا مختلف بفرز، فلرز، پی ایچ اور چالکتا کے ساتھ کوئی خاص تعلق نہیں تھا، جو پی ایچ اور چالکتا کی اصلاح کی وجہ سے ہو سکتا ہے۔ رپورٹ شدہ کیس کے عمل کے حالات میں۔

 

3.2.3 CEX (بائنڈنگ - ایلیوشن موڈ)

CEX عمل کے ذریعے وائرس کو ہٹانا کافی مضبوط نہیں ہے۔ اعلی LRV گروپ میں LRV اور بفر، تجربہ کی سطح، یا کسی بھی کرومیٹوگرافک کالم کی خصوصیات، جیسے کالم کی اونچائی اور رال کی قسم کے درمیان کوئی خاص تعلق نہیں تھا۔ تاہم، اعلی LRV مطالعہ میں استعمال ہونے والی توازن/لوڈنگ اور ایلیوشن pH قدریں دونوں کم تھیں، 5.3±0.2; کم LRV گروپ میں، pH 6 تھا۔{5}}±0.2۔ ایک اور عنصر یہ ہے کہ بفر میں نمک کا ارتکاز بھی LRV قدر میں فرق کا سبب بن سکتا ہے۔ کم LRV مطالعہ میں استعمال ہونے والے بفر میں نمک کا ارتکاز زیادہ تھا، لوڈنگ/بیلنسنگ سلوشن میں اوسطاً 290±120 mM اور eluent میں 340±70 mM، جبکہ اعلی LRV مطالعہ میں NaCl کی ارتکاز 58 تھی۔ بالترتیب ±27 mM اور 183±31 mM۔

 

3.2.4 کم پی ایچ غیر فعال ہونا

کم پی ایچ کے عمل میں، پی ایچ ایک اہم عمل پیرامیٹر ہے، اور ریٹرو وائرس کو ڈگری کے لحاظ سے غیر فعال کرنے کے لیے 3.8 کا پی ایچ کافی ہے۔ کم LRV گروپ کا pH 3.9 تھا، جبکہ اعلی LRV مطالعہ کا pH 3.4 تھا۔

 

3.2.5 وائرس فلٹرنگ کو ہٹانا

چھوٹے اور بڑے دونوں یپرچر فلٹرز کے لیے، MLV ہٹانے کی LRV ویلیو 2log10 سے کم نہیں تھی، اور صرف 1% اسٹڈیز 3log10 سے کم تھیں (شکل 2 میں h اور i کالموں میں دکھایا گیا ہے)۔ بڑے یپرچر وائرس فلٹرز کے ذریعے ریٹرو وائرس کی مجموعی کلیئرنس چھوٹے یپرچر وائرس فلٹرز کے مقابلے میں کم تھی (جیسا کہ شکل 1 میں سی بار چارٹ میں دکھایا گیا ہے)۔ parvovirus ہٹانے کے نتیجے کو متاثر کرنے کی بنیادی وجہ مختلف فلٹر اقسام ہیں۔ عام طور پر، اینٹی وائرس فلٹرنگ قابل اعتماد طریقے سے وائرس کو ہٹا سکتی ہے۔

یہ عمل ہیں پروٹین A(a)، AEX پینیٹریشن موڈ (b)، CEX بائنڈنگ - elution mode (c)، AEX بائنڈنگ Ⅰ elution موڈ (d)، کم pH غیر فعال ہونا ("نامکمل" اور "مکمل" کلیئرنس) (e ~ g)، اور بڑے تاکنا سائز (h) اور چھوٹے تاکنا سائز (i ~ j) ڈیوائرس فلٹریشن (جہاں، a ~ i: Retrovirus؛ j: پارو وائرس)۔

 

04 وائرس سیکورٹی کی تشخیص میں اختراعات اور چیلنجز

ڈاون اسٹریم بائیو فارماسیوٹیکل عمل کے میدان میں مسلسل ترقی اور جدت لامحالہ وائرس کلیئرنس کی تشخیص میں جدت لائے گی۔ اپ اسٹریم اور ڈاون اسٹریم کے عمل میں پیشرفت - جیسے کہ مسلسل اسٹریم بائیو پروسیسز - نے وائرس کو ختم کرنے کے موثر اور مضبوط عمل کا جائزہ لینا اور اسے قائم کرنا ضروری بنا دیا ہے۔ مسلسل بہاؤ کے دوران، وائرس کو غیر فعال کرنے اور وائرس کی فلٹرنگ جیسے اقدامات کو بیچ موڈ میں انجام دینے کی توقع کی جاتی ہے۔ اگرچہ مسلسل بہاؤ موڈ میں کرومیٹوگرافک عمل کی وائرس کو ہٹانے کی صلاحیت بیچ پروسیسنگ سے کافی مختلف نہیں ہونی چاہیے، لیکن اسے ڈیٹا کے ذریعے سپورٹ کیا جانا چاہیے۔

 

05 آؤٹ لک

وائرولوجیکل سیفٹی کے نقطہ نظر سے، بائیو فارماسیوٹیکل انڈسٹری کی بہترین حفاظت کو بڑی حد تک وائرل سیفٹی کے لیے صنعت کی تین اہم حکمت عملیوں پر سختی سے عمل کرنے سے منسوب کیا جا سکتا ہے: مواد اور سیل بینک کے ذرائع کی مناسب طور پر سورسنگ اور جانچ، وائرل کلیئرنس کے جائزوں کی دستاویز کرنا (وائرس کی توثیق کا مطالعہ)، اور عمل میں وائرل ٹیسٹنگ۔ نوول سیل سبسٹریٹس کے ذریعے تیار کی جانے والی حیاتیاتی ادویات کی خصوصیات مختلف خطرات کے ساتھ تبدیل ہو سکتی ہیں، اور حیاتیاتی ادویات کی حفاظت کو یقینی بنانے کے لیے رسک مینجمنٹ کی اچھی حکمت عملیوں کی ضرورت ہے۔ گائیڈلنگ ٹیکنالوجی نے پیشہ ورانہ تکنیکی ٹیم کا تجربہ کیا ہے، جو چھوٹے ٹرائل، پائلٹ ٹرائل سے لے کر بڑے پیمانے پر پیداوار تک فلٹریشن کے عمل کا احاطہ کرتی ہے، ہماری جھلی اور جھلی کے فلٹرز بڑے پیمانے پر پری فلٹریشن، مائیکرو فلٹریشن، الٹرا فلٹریشن، نینو فلٹریشن حراستی، نکالنے اور علیحدگی میں استعمال ہوتے ہیں۔ ہماری بہت سی پروڈکٹ لائنیں، چھوٹے سنگل یوز لیبارٹری فلٹریشن سے لے کر پروڈکشن پر مبنی فلٹریشن سسٹم، بانجھ پن کی جانچ، فرمینٹیشن، سیل کلچر اور بہت کچھ، بڑھتی ہوئی پیداوار کو یقینی بناتی ہیں۔

جیولنگ پہلے اشارے کے طور پر مصنوعات کے معیار کو یقینی بنانے کے لیے، دریافت کرنے کے لیے سڑک پر "لاگتیں کم کریں، کارکردگی میں اضافہ کریں" کے تعاقب میں، مستقبل میں آپ کے ساتھ مل کر صنعت کے چیلنجوں کا سامنا کرنے اور بہتر ترقی کے لیے کام کرنے کے منتظر ہیں۔